掃描電鏡在進(jìn)行觀(guān)察前,要對樣品作相應的處理。掃描電鏡樣品制備的主要要求是盡可能使樣品的表面結構保存好,沒(méi)有變形和污染,樣品干燥并且有良好導電性能。
1.樣品的初步處理
?、偃〔娜〔牡幕疽蠛屯干潆婄R樣品制備相同。但對掃描電鏡來(lái)說(shuō),樣品可以稍大些,面積可達8×8mm,厚度可達5mm。對于易卷曲的樣品如血管、胃腸道粘膜等,可固定在濾紙或卡片紙上,以充分暴露待觀(guān)察的組織表面;
?、跇悠返那逑从脪呙桦婄R觀(guān)察的部位常常是樣品的表面,即組織的游離面。由于樣品取自活體組織,其表面常有血液、組織液或粘液附著(zhù),這會(huì )遮蓋樣品的表面結構,影響觀(guān)察。因此,在樣品固定之前,要將這些附著(zhù)物清洗干凈;
?、酃潭ㄓ迷噭┖屯干潆婄R樣品制備相同,常用戊二醛及鋨酸雙固定。由于樣品體積較大,固定時(shí)間應適當延長(cháng)。也可用快速冷凍固定;
?、苊撍畼悠方?jīng)漂洗后用逐級增高濃度的酒精或丙酮脫水,然后進(jìn)入中間液,一般用醋酸異戊酯作中間液。
2.樣品的干燥掃描電鏡觀(guān)察樣品要求在高真空中進(jìn)行。無(wú)論是水或脫水溶液,在高真空中都會(huì )產(chǎn)生劇烈地汽化,不僅影響真空度、污染樣品,還會(huì )破壞樣品的微細結構。
3.樣品的導電處理生物樣品經(jīng)過(guò)脫水、干燥處理后,其表面不帶電,導電性能也差。用掃描電鏡觀(guān)察時(shí),當入射電子束打到樣品上,會(huì )在樣品表面產(chǎn)生電荷的積累,形成充電和放電效應,影響對圖象的觀(guān)察和拍照記錄。